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植物凝膠是植物組織培養過(guò)程中用來(lái)凝固培養基的物質(zhì),其自身一般不具有營(yíng)養,作為固體支持物存在,一般在選用時(shí)考慮三個(gè)方面:1、使用方便;2、對培養植物不產(chǎn)生不利影響,不與培養基中其他組分例如抗生素發(fā)生反應;3、具有較好的透明度。
目前比較常用的植物凝膠主要包括:瓊脂(Agar)、結冷膠(Gellan Gum)、卡拉膠(Carrageenan)等。瓊脂是一種天然產(chǎn)物,主要來(lái)自紅藻科的兩個(gè)屬:石花菜屬(Gellidium)和江籬屬(Gracillaria)。石花菜屬本身小且生長(cháng)緩慢,很難獲得,不經(jīng)濟,但其來(lái)源的瓊脂比江籬屬來(lái)源的具有更高的凝膠強度。由于瓊脂來(lái)自天然藻類(lèi),所以產(chǎn)品品質(zhì)容易受到原材料由于生長(cháng)環(huán)境變化導致的影響,最終產(chǎn)生批間差異。不過(guò)西美杰代理的Phytotech Labs做為具有20多年生產(chǎn)經(jīng)驗的植物組培產(chǎn)品供應商,在每批瓊脂出廠(chǎng)時(shí),會(huì )進(jìn)行清晰度、凝膠強度、植物生物生長(cháng)以及產(chǎn)品其他理化性質(zhì)的評估,以確保產(chǎn)品的穩定性。卡拉膠同樣來(lái)源于藻類(lèi),但比瓊脂有更好的透明度。結冷膠是新型的凝膠,來(lái)源于微生物發(fā)酵產(chǎn)物,批間差更加穩定,而且具有用量小,透明度更高的有點(diǎn)。
西美杰代理的專(zhuān)業(yè)植物培養基品牌Phytotech Labs,可以為廣大植物客戶(hù)提供以下不同型號的植物凝膠:
A111 |
瓊脂(江蘺來(lái)源) |
~1150g/cm2 |
6-10g/L |
通用型瓊脂,價(jià)格更優(yōu)惠 |
A296 |
瓊脂(石花菜來(lái)源) |
~900 g/cm2 |
6-10g/L |
普通植物研究,微生物研究;石花菜生長(cháng)緩慢很難獲得,不經(jīng)濟,所以?xún)r(jià)格較A111高 |
A175 |
高純度瓊脂 |
~1100 g/cm2 |
6-10g/L |
用于胚胎發(fā)生等關(guān)鍵研究的高純度瓊脂;可替代A111,但比A111更純凈 |
A133 |
瓊脂結冷膠混合物 |
TBD |
3.5-5 g/L |
用于工業(yè)化放大培養 |
C257 |
卡拉膠 |
TBD |
6-10g/L |
用于原生質(zhì)體培養 |
C2000 |
卡拉膠(高透明度) |
>800 g/cm2 |
6-10g/L |
用于原生質(zhì)體培養 |
G434 |
結冷膠 |
>800 g/cm2 |
2-4 g/L |
高透明度 |
G3251 |
結冷膠 |
400-700 g/cm2 |
2-4 g/L |
G434升級款 |
使用注意事項:
l G434與氨基酸糖苷類(lèi)抗生素(特別是卡那霉素和潮霉素B)一起使用對植物生長(cháng)有影響。如遇此類(lèi)情況,建議降低抗生素的使用濃度。
l 結冷膠的溶解要求比較特殊,一是溫度,結冷膠不溶于冷水,一定要是加入熱水攪拌溶解;二是培養基中二價(jià)陽(yáng)離子濃度是結冷膠凝固的關(guān)鍵,一般是Mg2+,和Ca2+這2種離子的總濃度在4-10mM適中,而且2種離子的濃度最好都不要低于1.5mM,低于或者過(guò)高都會(huì )影響凝膠效果,一般來(lái)說(shuō)MS培養基中二價(jià)離子濃度是足夠的,1/2MS培養基用結冷膠也可以凝固的很好,目前確定不適合用結冷膠的培養基有DKW,SH,LS。三是pH值,結冷膠凝固最適合pH值為5.8,一般高溫滅菌影響不大,但不排除因為高壓條件變化導致pH值變化影響的凝膠效果。
l 植物凝膠尤其是瓊脂不凝固是與pH值有關(guān)系,pH過(guò)低導致的。出現此類(lèi)情況是因為調節pH值的操作問(wèn)題,很多客戶(hù)都先調節了pH值,然后再加入了植物凝膠,這個(gè)過(guò)程中pH值可能會(huì )降低到5.2,才會(huì )不凝固。解決辦法:加入瓊脂粉后調節pH值。